晚期糖基化終端產(chǎn)物（AGEs）檢測說明書
研究發(fā)現(xiàn)AGEs的來源主要是葡萄糖，還有二羰基化合物、短鏈還原糖和葡萄糖的其他代謝途徑。目前確定結(jié)構(gòu)屬于AGE的單體化合物有CML、CEL、Pentosidine, Pyrraline, Imidazolone, Crosslin等，針對這些化合物和AGEs、AGE1～4生產(chǎn)的抗體大量應用于生命科學和醫(yī)學領域，發(fā)表的相關論文一一都證實了AGEs是老化、與老化相關的慢性疾病發(fā)生的重要影響因素。
上海恒遠生物科技有限公司晚期糖基化終端產(chǎn)物（AGEs）試劑盒*，提供技術指導。您的咨詢與訂購，： 手機 ：何
檢 測 原 理
葡萄糖來源的AGEs （Glc-AGEs）ELISA試劑盒利用的是基于“三明治”原理的固相酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。如右圖所示，96孔板的表面有一層單克隆抗體涂層可直接識別樣品中Glc-AGEs的特異性抗原位點， 然后使用HRP標記的anti-AGE抗體結(jié)合Glc-AGEs形成“三明治”復合物，zui后酶顯色對樣品進行定性和定量研究。
檢 測 對 象
人或其他動物的純化蛋白、血漿、血清和細胞裂解液。
試 劑 盒 成 分
（1） Antibody coated microtiter plate, 96 wells, 1 plate
（2） Glucose-derived AGEs standard, 250 uL×2
（3） Reference standard and sample diluent, 15 mL×1
（4） HRP- anti AGEs antibody concentrate（×100）, 60 uL×1 （mouse monoclonal antibody）
（5） OPD （o-phenylendiamine） tablets, 2 tab.
（6） Substrate solution, 30 mL×1
（7） Stop solution, 15 mL×1
（8） Wash buffer concentrate （×20） , 30 mL×1
（9） Dilution plate, 1 plate
實 驗 準 備
| 工
作
液
配
制 | 清 洗 液 | 使用前確保wash buffer濃縮液內(nèi)無結(jié)晶顆粒，往30 ml的濃縮液內(nèi)加入570 ml去離子水即為工作液，此溶液可以保存在2 |
| 抗體稀釋液 | 用10倍體積的清洗液稀釋"Reference standard and sample diluent"即可。 | |
| 標 準 溶 液 | 用等體積"Reference standard and sample diluent" 稀釋"Glucose-derived AGEs standard"（500ng/ml），如下圖所示，依次配成250, 125, 62.5, 31.25, 15.63, and 7.82 ng/ml的溶液。 | |
| HRP標記-AGEs 抗體（100×） | 用5 ml 的抗體稀釋溶液稀釋50ul 的HRP-anti AGEs antibody濃縮液，稀釋后的抗體不能保存。 | |
| 顯 色 液 | 在使用前加1片OPD tablet到13 ml 底物溶液即可，此溶液需現(xiàn)配現(xiàn)用。 | |
| 待測樣品的準備 | 用"Reference standard and sample diluent"稀釋樣品，若樣品濃度非常高，需用PBS進行預稀釋，zui后再調(diào)整濃度至100×或更高。 | |
實 驗 準 備
| 1 | 96孔板準備 | 加入300 ul的清洗液至每個孔內(nèi)，溫育30 min；*倒掉孔內(nèi)溶液后，再加入300ul 清洗液。再重復此步2次。 |
| 2 | 一 抗 反 應 | 按50 ul/孔的量加入標準溶液、稀釋樣品孵育1 hour，可以做兩個平行。孵育完成后吸去反應液，用300 ul清洗液清洗3次。 |
| 3 | 二 抗 反 應 | 加50 ul/孔的100倍稀釋的HRP- anti AGEs antibody，孵育1 hour。孵育完成后吸去反應液，用300 ul清洗液清洗3次。 |
| 4 | 顯 色 | 加100 ul/孔顯色液，孵育10 min； |
| 5 | 終 止 反 應 | 加100ul/孔終止液終止酶顯色反應； |
| 6 | 讀取吸光度 | 酶標儀在490 nm下讀取吸光值； |
| 7 | 計 算 結(jié) 果 | 使用標準曲線計算出AGEs的濃度，使用4-Parameter Logistic Model分析數(shù)據(jù)。 |
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